Afinitní chromatografie pro analýzu vybraných proteinů v medu

Abstract

Honey is currently one of the most adulterated foods despite advances in analytical methods. The aim of this thesis is to use proteomic methods to contribute to the characterization of proteins in honey for quality and authenticity assessment. The potential of affinity chromatography with p-aminobenzamidine (p-ABA) as a ligand for the analysis of proteins in honey was investigated. In one part of the thesis, 10 complex honey samples were analysed, revealing the presence of proteins that do not belong in honey in 90% of the samples. Aspergillus niger α-amylase, Saccharomyces cerevisiae invertase and soybean storage proteins were identified in the honeys. These protein contaminants can enter honey in different ways, either by adding enzymatically prepared syrup to honey, feeding the bees, or in the case of α-amylase, by direct addition in attempt to increase diastase activity, which is legislatively monitored. Furthermore, adulterated acacia honey and authentic acacia honey were analysed by affinity chromatography with p-ABA as ligand. Comparison of electrophoretic profiles showed that almost all proteins in the honey were bound to p-ABA and eluted by both calcium and zinc ions, although there were differences between the fractions. Analysis of the samples using this method did not result in the...

Med patří i přes pokroky ve vývoji analytických metod k nejfalšovanějším potravinám. Cílem této diplomové práce je pomocí proteomických metod přispět k charakterizaci proteinů v medu pro hodnocení kvality a autenticity. Je ověřován potenciál afinitní chromatografie s využitím p-aminobenzamidinu (p-ABA) jako ligandu pro analýzu proteinů v medu. V jedné části práce byla provedena analýza 10 komplexních vzorků medu, která odhalila v 90 % vzorků přítomnost proteinů, které do medu nepatří. V medech byla identifikována α-amylasa Aspergillus niger, invertasa Saccharomyces cerevisiae a zásobní proteiny sóji. Tyto proteinové kontaminanty se do medu mohou dostávat různými způsoby, jednak přidáváním sirupu připraveným enzymatickým způsobem, dokrmováním včel, a v případě α-amylasy je pravděpodobný také cílený přídavek pro zvýšení diastázové aktivity, která je legislativně sledovaná. Dále byl pomocí afinitní chromatografie s p-ABA jako ligandem byl analyzován falšovaný akátový med a autentický akátový med. Srovnáním elektroforetických profilů se ukázalo, že téměř všechny proteiny v medu se navázaly na p-ABA a byly eluovány vápenatými i zinečnatými ionty, ačkoliv mezi frakcemi byly rozdíly. Analýza vzorků touto metodou sice nevedla k izolaci cizích proteinů, ale umožnila identifikaci různých vápníkově a zinkově...