Využití hmotnostního spektrometru při aminokyselinové analýze

Abstract

Amino acid analysis is used across many disciplines. However, it carries certain problems such as missing asparagine, glutamine and tryptophan, due to the primary purpose for which it was developer. Nevertheless, there are many applications in which these missing amino acids need to be quantified as well. A faster but less sensitive alternative would be the mass spectrometry detection, which also makes it possible to analyze other metabolites and non-amino compounds. It is necessary to know all the possibilities and limits of the newly developed method to be applicable to the full benefit. This bachelor thesis involves both a method in which individual amino acids are separated using hydrophilic interaction chromatography and subsequently detected by mass spectrometry as well as its basic characterization and comparison with a commonly used fluorescence method commercially available from Waters.

Aminokyselinová analýza našla v průběhu let uplatnění napříč mnoha obory. Díky prvotnímu účelu, pro který byla vyvinuta si s sebou nese určité problémy jako je např. chybějící asparagin, glutamin a tryptofan. Existuje spoustu aplikací, ve kterých je potřeba kvantifikovat i tyto chybějící aminokyseliny. Rychlejší, ale méně citlivou alternativou by mohla být detekce pomocí hmotnostní spektrometrie, která navíc umožňuje analýzu i ostatních metabolitů a látek bez aminoskupiny. Aby byla nově vyvinutá metoda užitečná je potřeba znát její možnosti a limity. Tato práce zahrnuje jak metodu, ve které se jednotlivé aminokyseliny separují na hydrofilní interakční chromatografii a následně detekují pomocí hmotnostní spektrometrie, tak její základní charakterizaci a porovnání s dosud běžně používanou fluorescenční metodou, komerčně dostupnou od firmy Waters.