Kooperativita složek systému cytochromů P450 a ovlivnění metabolismu léčiv a karcinogenů

Holý, Petr

Co-operativity of cytochrome P450 system and its impact on drug and carcinogen metabolism

dc.contributor.advisor	Hodek, Petr
dc.creator	Holý, Petr
dc.date.accessioned	2021-03-24T21:34:02Z
dc.date.available	2021-03-24T21:34:02Z
dc.date.issued	2015
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/20.500.11956/61859
dc.description.abstract	Systém oxidas se smíšenou funkcí (MFO systém) hraje důležitou roli v metabolismu mnoha endogenních látek a xenobiotik (např. karcinogenů, léčiv). Membránové hemoproteiny nazývané cytochromy P450 jsou zásadní složkou tohoto systému. Reakce katalyzované cytochromy P450 jsou ovlivňovány působením jiného proteinu MFO systému, a to cytochromem b5 (cyt b5). Mechanismus, jakým cyt b5 působí, ještě nebyl zcela objasněn. Jednou z možností studia této protein-proteinové interakce je metoda kovalentního síťování. Záměnou methioninu ve struktuře cyt b5 za jeho foto-aktivovatelný analog (foto-methionin) je možné připravit analog cyt b5 (foto-cyt b5), který po aktivaci UV zářením kovalentně váže cytochrom P450 v membránovém prostředí. Tato práce se zabývá expresí a izolací rekombinantního analogu cyt b5 s pouze jednou pozicí pro methionin (96) v primární struktuře proteinu a jeho substitucí za foto-methionin. Protein byl purifikován s výtěžkem 6 mg na 1 l bakteriální suspenze. Analýza hmotnostní spektrometrií (MALDI-TOF/TOF) ukázala, že methionin byl v sekvenci substituován foto-reaktivním analogem z asi 30 % (pokrytí sekvence 77 %). Foto- cyt b5 byl použit k fixování transientní protein-proteinové interakce s cytochromem P450 2B4 (CYP2B4). Foto-cyt b5 byl rekonstituován v lipidovém systému s CYP2B4 a...	cs_CZ
dc.description.abstract	The system of mixed-function oxidases (MFO system) has a significant role in metabolism of many endogenous compounds, as well as xenobiotics (for ex. karcinogens, drugs). Membrane-bound haemoproteins called cytochromes P450 are a vital part of that system. Reactions catalyzed by cytochromes P450 are influenced by another protein of the MFO system, cytochrome b5. The mechanism of this cyt b5 agency has not yet been fully described. One of methods used for study of this protein-protein interaction is covalent cross- linking. By replacing one of three methionines in the cyt b5 structure by a photo-reactive analogue (photo-methionine), an analogue of cyt b5 (photo-cyt b5) can be obtained. When activated by UV radiation, the protein covalently bonds cytochrome P450 in a membrane environment. This paper focuses on expression and isolation of a recombinant cyt b5 analogue with only one methionine position (96) in the protein structure and substitution by photo-methionine. Protein was purified in a yiedl of 6 mg from 1 liter of baterial suspension. Analysis by mass spectrometry (MALDI-TOF/TOF) showed methionine to have been substituted by the photo-reactive analogue in approx. 30 %. Photo-cyt b5 was used to fixate transient protein-protein interactions with cytochrome P450 2B4 (CYP2B4). Photo-cyt b5 was...	en_US
dc.language	Čeština	cs_CZ
dc.language.iso	cs_CZ
dc.publisher	Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakulta	cs_CZ
dc.subject	NADPH:cytochrome P450 oxidoreductasa	en_US
dc.subject	cytochrome b5	en_US
dc.subject	protein expression	en_US
dc.subject	fotocrosslinking	en_US
dc.subject	NADPH:cytochrom P450 oxidoreduktasa	cs_CZ
dc.subject	cytochrom b5	cs_CZ
dc.subject	exprese proteinu	cs_CZ
dc.subject	fotosíťování	cs_CZ
dc.title	Kooperativita složek systému cytochromů P450 a ovlivnění metabolismu léčiv a karcinogenů	cs_CZ
dc.type	bakalářská práce	cs_CZ
dcterms.created	2015
dcterms.dateAccepted	2015-06-08
dc.description.department	Department of Biochemistry	en_US
dc.description.department	Katedra biochemie	cs_CZ
dc.description.faculty	Faculty of Science	en_US
dc.description.faculty	Přírodovědecká fakulta	cs_CZ
dc.identifier.repId	141149
dc.title.translated	Co-operativity of cytochrome P450 system and its impact on drug and carcinogen metabolism	en_US
dc.contributor.referee	Chmelík, Josef
dc.identifier.aleph	002026260
thesis.degree.name	Bc.
thesis.degree.level	bakalářské	cs_CZ
thesis.degree.discipline	Biochemie	cs_CZ
thesis.degree.discipline	Biochemistry	en_US
thesis.degree.program	Biochemistry	en_US
thesis.degree.program	Biochemie	cs_CZ
uk.thesis.type	bakalářská práce	cs_CZ
uk.taxonomy.organization-cs	Přírodovědecká fakulta::Katedra biochemie	cs_CZ
uk.taxonomy.organization-en	Faculty of Science::Department of Biochemistry	en_US
uk.faculty-name.cs	Přírodovědecká fakulta	cs_CZ
uk.faculty-name.en	Faculty of Science	en_US
uk.faculty-abbr.cs	PřF	cs_CZ
uk.degree-discipline.cs	Biochemie	cs_CZ
uk.degree-discipline.en	Biochemistry	en_US
uk.degree-program.cs	Biochemie	cs_CZ
uk.degree-program.en	Biochemistry	en_US
thesis.grade.cs	Výborně	cs_CZ
thesis.grade.en	Excellent	en_US
uk.abstract.cs	Systém oxidas se smíšenou funkcí (MFO systém) hraje důležitou roli v metabolismu mnoha endogenních látek a xenobiotik (např. karcinogenů, léčiv). Membránové hemoproteiny nazývané cytochromy P450 jsou zásadní složkou tohoto systému. Reakce katalyzované cytochromy P450 jsou ovlivňovány působením jiného proteinu MFO systému, a to cytochromem b5 (cyt b5). Mechanismus, jakým cyt b5 působí, ještě nebyl zcela objasněn. Jednou z možností studia této protein-proteinové interakce je metoda kovalentního síťování. Záměnou methioninu ve struktuře cyt b5 za jeho foto-aktivovatelný analog (foto-methionin) je možné připravit analog cyt b5 (foto-cyt b5), který po aktivaci UV zářením kovalentně váže cytochrom P450 v membránovém prostředí. Tato práce se zabývá expresí a izolací rekombinantního analogu cyt b5 s pouze jednou pozicí pro methionin (96) v primární struktuře proteinu a jeho substitucí za foto-methionin. Protein byl purifikován s výtěžkem 6 mg na 1 l bakteriální suspenze. Analýza hmotnostní spektrometrií (MALDI-TOF/TOF) ukázala, že methionin byl v sekvenci substituován foto-reaktivním analogem z asi 30 % (pokrytí sekvence 77 %). Foto- cyt b5 byl použit k fixování transientní protein-proteinové interakce s cytochromem P450 2B4 (CYP2B4). Foto-cyt b5 byl rekonstituován v lipidovém systému s CYP2B4 a...	cs_CZ
uk.abstract.en	The system of mixed-function oxidases (MFO system) has a significant role in metabolism of many endogenous compounds, as well as xenobiotics (for ex. karcinogens, drugs). Membrane-bound haemoproteins called cytochromes P450 are a vital part of that system. Reactions catalyzed by cytochromes P450 are influenced by another protein of the MFO system, cytochrome b5. The mechanism of this cyt b5 agency has not yet been fully described. One of methods used for study of this protein-protein interaction is covalent cross- linking. By replacing one of three methionines in the cyt b5 structure by a photo-reactive analogue (photo-methionine), an analogue of cyt b5 (photo-cyt b5) can be obtained. When activated by UV radiation, the protein covalently bonds cytochrome P450 in a membrane environment. This paper focuses on expression and isolation of a recombinant cyt b5 analogue with only one methionine position (96) in the protein structure and substitution by photo-methionine. Protein was purified in a yiedl of 6 mg from 1 liter of baterial suspension. Analysis by mass spectrometry (MALDI-TOF/TOF) showed methionine to have been substituted by the photo-reactive analogue in approx. 30 %. Photo-cyt b5 was used to fixate transient protein-protein interactions with cytochrome P450 2B4 (CYP2B4). Photo-cyt b5 was...	en_US
uk.file-availability	V
uk.grantor	Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakulta, Katedra biochemie	cs_CZ
thesis.grade.code	1
dc.contributor.consultant	Ječmen, Tomáš
uk.publication-place	Praha	cs_CZ
uk.thesis.defenceStatus	O
dc.identifier.lisID	990020262600106986