Model experimentálně regulovatelné exprese dipeptidylpeptidasy IV v gliomových buněčných liniích

Abstract

"Dipeptidylpeptidase IV aktivitou a/nebo strukturou homologní" (DASH) molekuly predstavují nove definovanou skupinu multifunkcních molekul, z nichž vetšina nese hydrolytickou aktivitu podobnou dipeptidylpeptidase IV (DPPIV, EC 3.4.14.5, identická s diferenciacním antigenem lymfocytu CD26), která odštepuje X-Pro dipeptidy od N-konce peptidu a bílkovin. Dosavadní poznatky svedcí o významu techto molekul v procesech vzniku a rozvoje rady nádorových onemocnení. Cílem práce je (i) prehled problematiky DASH molekul a jejich funkcních substrátu v nádorech odvozených z neuroektodermu a (ii) príprava stabilne transfekovaných lidských glioblastomových bunecných linií s indukovatelnou expresí DPPIV. Pro tuto práci byly pripraveny originální vektory s lidským genem DPPIV a s její v aktivním centru mutovanou formou pro posouzení významu vlastní enzymové aktivity výsledného produktu. Transgenní bunecné linie umožní studovat biologické úlohy DPPIV v procesech vzniku a rozvoje nádoru odvozených z neuroektodermu - v bunecném rustu, invazi a migraci na úrovni vlastní transformované bunky v modelu in vitro a v komplexním systému in vivo po homotopní implantaci do imunodeficientní myši. Vzniklé bunecné linie budou tedy použity jako nástroj studia jak "autokrinního" významu DPPIV pro vlastní exprimující transformované bunky,...

"Dipeptidyl peptidase IV Activity and/or Structure Homologues" (DASH) represent a newly defined group of multifunctional molecules, typically bearing dipeptidyl peptidase IV-like hydrolytic activity. Dipeptidyl peptidase IV (DPPIV, EC 3.4.14.5, identical to CD26) cleaves out X-Pro dipeptides from the N-terminus of peptides. Recent knowledge shows substantial role of DASH in cancer pathogenesis. Here we present (i) an overview of the issue of DASH molecules and their functional substrates in the neuroectodermal tumor and (ii) a preparation of stable transfected human glioblastoma cell lines with inducible gene expression of DPPIV. Vectors containing human DPPIV gene and its mutated form in the catalytic active site have been prepared to assess the importance of the enzymatic activity of the final product. This will enable us to study the biological role of DPPIV in genesis and progression of neuroectodermal tumors - cells growth, invasion and migration of transformed glial cells in vitro. Moreover, complex role of DPPIV will be studied using a model of homotopic application of transfected cells into the brain of immunodeficient mice. Prepared cell lines provide more consistent information about DPPIV from the point of view of its "autocrine" importance for the expressing cells, as well as its potential...