Jaká je funkce proteinu Het1p patogenní kvasinky Candida albicans?

Abstract

Het1p is a protein found in pathogenic yeast Candida albicans. While this yeast has been widely studied, 66 % of its genes still has no clear evidence of their function, including Het1p. The role of this protein is associated with the localization of glucosylceramide in C. albicans, although no interaction with glucosylceramide or other lipids has been demonstrated. However, the Het1p protein is named after a phenomenon called heterokaryon incompatibility. A further clue to the function of this protein is its similarity to the IA3 protein, found in the yeast Saccharomyces cerevisiae, which is an inhibitor of the aspartate protease Pep4p. Given the lack of information in the literature on this protein, the aim of this work was to produce a recombinant Het1p protein and to characterize its structural and functional properties. Therefore, this work deals with the expression, purification and characterization of Het1p protein. Furthermore, the structure of this protein was studied by CD spectroscopy and protein crystallography. Finally, the binding of sphingolipids to this protein was tested using three newly developed methods. In the course of this work, the expression of this protein was optimized, with a yield increase of about 75 from the original protocol. It has been found that the oligomeric...

Het1p je protein pocházející z kvasinky Candida albicans. Přestože je tato kvasinka široce studována, 66 % jejích genů nemá jasnou funkci. Jedním z těchto proteinů, jejichž funkce nebyla charakterizována, je i Het1p. Význam tohoto proteinu je skloňován s lokalizací glukosylceramidu v buňce kvasinky C. albicans, přestože nebyla prokázána interakce tohoto proteinu s glukosylceramidem, ani jinými lipidy. Protein Het1p však nese jméno po fenoménu, který se nazývá heterokaryonová inkompatibilita. Dalším vodítkem k funkci tohoto proteinu je jeho podobnost s proteinem IA3, nacházejícím se v kvasince Saccharomyces cerevisiae, který je inhibitorem aspartátové proteasy Pep4p. Vzhledem k nedostatku informací z literatury o tomto proteinu bylo cílem práce připravit rekombinantní protein Het1p a charakterizovat jeho vlastnosti a funkci. Tato práce tedy pojednává a expresi, purifikaci a charakterizaci proteinu Het1p. Dále byla studována struktura tohoto proteinu pomocí CD spektroskopie a proteinové krystalografie. Nakonec byla testována vazba sfingolipidů na tento protein pomocí tří nově vyvinutých metod. V průběhu této práce byla optimalizována exprese tohoto proteinu, kdy z původního protokolu byl výtěžek zvýšen asi 75. Bylo zjištěno, že oligomerní stav tohoto proteinu je v rovnováze mezi monomerním a...