Studium interakce placentární aromatasy s parfémy

Abstract

Aromatase (CYP19A1, AROM) is a cytochrome P450 enzyme that catalyses the metabolic transformation of androgens into oestrogens by introducing an aromatic A-ring into these precursors. Disruption of its enzymatic function by endocrine-disrupting chemicals (EDCs) can result in a variety of ailments. The inhibitory effect of certain perfumes on aromatase was confirmed in a recent study. However, the enzyme system used was produced recombinantly in baculosomes. As part of this bachelor's thesis, the inhibitory effects of perfumes on aromatase in human placental microsomes were investigated. By comparing and then measuring oestradiol production in individual reactions using TLC and finally HPLC/MS, we were able to first identify and then quantify these effects. Interactions between perfumes and cytochrome P450 reductase (CPR) were also examined in multiple expression systems (microsomes, baculosomes, bactosomes). By conducting these experiments, we were able to show that microsomal aromatase is also susceptible to inhibition by both of the tested perfumes. The inhibitory effects observed in microsomes were similiar or even greater than those seen in baculosomes. We also found that the addition of either tested perfumes did not impact CPR acitivty in baculosomes or bactosomes. Conversely, cytochrome P450...

Aromatasa (CYP19A1,AROM) je cytochrom P450 zprostředkovávající přeměnu androgenních pohlavních hormonů na estrogeny jejich aromatizací. Narušení aktivity tohoto enzymu látkami ze skupiny tzv. endokrinních disruptorů může mít pro lidský organismus mnoho nepříznivých důsledků. Inhibiční účinky parfémů vůči lidské aromatase byly zjištěny v rekombinantně exprimovaném systému - v tzv. bakulosomech. V předkládané bakalářské práci byly ověřovány účinky parfémů na aktivitu lidské placentární aromatasy v přirozeném mikrosomálním systému. V připravených reakčních směsích byly sledovány změny v produkci estrogenu estradiolu, a to nejprve s vyhodnocením metodou TLC. Závěrečné vyhodnocení a kvantifikace probíhaly metodou HPLC/MS. Zároveň byla napříč několika expresními systémy (mikrosomálním, bakulosomálním a baktosomálním) v přítomnosti testovaných parfémů sledována aktivita důležitého redoxního partnera aromatasy, NADPH:cytochrom P450 oxidoreduktasy (CYPOR). Provedené experimenty potvrdily inhibiční vlastnosti testovaných parfémů i v připravených placentárních mikrosomálních preparátech. Oba testované vzorky vykazovaly v mikrosomálním systému stejnou nebo větší míru inhibice lidské aromatasy než v systému bakulosomálním. Při stanovení aktivity CYPOR v reakčních směsích obsahujících parfém nebyla v...