Detection of prion strains using RT-QuIC assay

Abstract

Prionová onemocnění jsou skupinou progresivních, smrtelných neurodegenerativních poruch, které každoročně postihují přibližně 1-2 osoby na milion. Vzhledem ke své přenosné povaze a odolnosti vůči vlivům prostředí představují významné riziko pro veřejné zdraví, zejména pro patology a chirurgy, kteří jsou během výkonu své práce vystaveni kontaminovaným povrchům. Stále existuje prostor pro zdokonalení stávajících a vývoj nových protokolů pro odběr vzorků z prostředí. Tato studie je zaměřená na optimalizaci střených protokolů s různých povrchů, včetně plastu, skla a oceli, s cílem zlepšit kontrolu prionové kontaminace v klinickém a laboratorním prostředí. Projekt zahrnoval optimalizaci střených protokolů s různými úpravami pomocí neinfekčních prionových proteinů a jejich detekci pomocí RT-QuIC metody a detekci prionových proteinů z environmentálních povrchů v prionové laboratoři a pitevních místnostech. Druhá část projektu se zaměřila na porovnání detekčních limitů u myších prionových kmenů (RML, mFu, mVCJD, mBSE, 139A, ME7 and 22L) s využitím dvou RT-QuIC substrátů - Second Generation rHaPrP90-231 substrátů a Bank Vole rPrP substrátů. Bylo vypočtena mediánová dávka pro nasednutí, aby bylo možné kvantifikovat infekčnost prionů. Získané výsledky mohou přispět ke zlepšení metod detekce prionů a...

Prion diseases are a group of progressive, fatal neurodegenerative disorders that affect approximately 1-2 people per million annually. Due to their transmissible nature and resistance to environmental degradation, they pose a significant public health risk, particularly for pathologists and surgeons exposed to contaminated surfaces during procedures. There is still room to enhance existing and to develop new environmental sample collecting protocols. This study involved optimizing protocols for prion detection from various surfaces, including plastic, glass, and steel, to improve the control of prion contamination in clinical and laboratory settings. The project involved swabbing protocol optimization with different modifications using non-infectious prion proteins with detection via silver staining and Western blotting, detection of infectious prion proteins via RT-QuIC assay and detection of prion proteins from environmental surfaces in prion laboratory and autopsy rooms. The second part of the project aimed to compare detection limits for mice prion strains (RML, mFu, mVCJD, mBSE, 139A, ME7 and 22L) using two RT-QuIC substrates - Second Generation rHaPrP90-231 substrate and Bank Vole rPrP substrate. Median seeding dose was calculated to quantify prion infectivity. Obtained results may...