Vývoj LC metody vhodné ke sledování stability ibrutinibového proléčiva

Abstract

Hlavním cílem této bakalářské práce bylo vyvinout a optimalizovat rychlou, přesnou a selektivní metodu kapalinové chromatografie se spektrofotometrickou detekcí, která byla využita ke sledování stability inovativního ibrutinibového proléčiva. Konkrétně byla vyvinuta a optimalizována metoda ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie s detekcí pomocí diodového pole (UHPLC/DAD). Separační proces probíhal na koloně InfinityLab Poroshell HPH-C8 (2.1×50 mm, 2.7 µm), temperované na 40 řC. Mobilní fáze se skládala ze směsi 100% acetonitrilu a 0,1% vodného roztoku kyseliny mravenčí, průtok zvolené mobilní fáze byl nastaven na 0,8 ml/min za režimu gradientové eluce, objem nastřikovaného vzorku byl 3 µl. Pro detekci byla využita vlnová délka 306 nm a celková doba analýzy vzorku proléčiva byla 10 minut. Byla sestrojena kalibrační závislost v koncentračním rozmezí ibrutinibového proléčiva 0,04-0,12 mg/ml. Na základě kalibrační závislosti byl stanoven limit detekce (LOD) na 4,78·10−4 mg/ml a limit stanovitelnosti (LOQ) na 1,45·10−3 mg/ml. Byla provedena stabilitní studie vlivu pH (2,2; 4,2 a 6,3) v daném časovém rozmezí na vzorek proléčiva. V žádném ze sledovaných pH nebyla v časové analýze patrná výrazná degradace proléčiva, nárůst nečistot ve vzorku, ani nebyl sledován vznik neznámých degradačních produktů....

The aim of this bachelor thesis was to develop and optimize rapid, accurate and selective liquid chromatography method with spectrophotometric detection, which was used to monitor the stability of the innovative ibrutinib prodrug. Specifically, a method based on ultra-high performance liquid chromatography with diode array detection (UHPLC/DAD) was developed and optimized. The separation process was performed on the InfinityLab Poroshell HPH-C8 (2.1×50 mm, 2.7 µm), which was tempered at 40 řC. The mobile phase consisted of 100% acetonitrile and 0,1% aqueous solution of formic acid. A constant flow rate of 0,8 ml/min was applied under gradient elution mode with a sample injection volume 3 µl. A wavelenght of 306 nm was used for detection and the total analysis time per sample was 10 minutes. The calibration curve was established for the ibrutinib prodrug in the concentration range of 0,04-0,12 mg/ml. Based on this calibration limit of detection (LOD) was calculated to be 4,78·10-4 mg/ml and limit of quantification (LOQ) was 1,45·10−3 mg/ml. A stability study of the effect of pH (2,2; 4,2 and 6,3) over a defined time period was performed on the prodrug sample. No significant degradation of the prodrug or increase in impurities was observed under any of the tested pH conditions throughout the duration...