Potential and limitations of canonical RNAi in mammals

Abstract

Kanonická RNA interference (RNAi) je sekvenčně specifický mechanismus degradace mRNA zprostředkovaný malými interferujícími RNA (siRNA) produkovanými z dvouvláknové RNA (dsRNA) pomocí RNázy Dicer. RNAi hraje zásadní roli v genové regulaci, antivirové imunitě a obraně proti transpozibilním elementům. U savců je aktivita RNAi v somatických buňkách minimální, protože zde Dicer primárně podporuje mikroRNA (miRNA) dráhu, která je nezbytná pro genovou regulaci. Tato adaptace je zprostředkována N-koncovou DExD helikázovou doménou (také známou jako HEL1 doména) Diceru, která podporuje specifickou selekci substrátu pro zajištění vysoce přesné biogeneze miRNA. Zkrácená varianta Diceru postrádající HEL1 doménu podporuje vysoce aktivní RNAi v myších oocytech. Můj doktorandský projekt byl zaměřen na zkoumání fenotypu a aktivace kanonické RNAi u geneticky modifikovaných myší exprimujících zkrácenou variantu Diceru (označenou DicerΔHEL1 ), která napodobuje variantu specifickou pro myší oocyty. Homozygotní mutace zcela nahrazující endogenní Dicer variantou DicerΔHEL1 způsobuje dysregulaci mikroRNA a perinatální úmrtnost u myší, což ukazuje, že zkrácená DicerΔHEL1 varianta nemůže funkčně nahradit úplný Dicer in vivo. Naproti tomu heterozygotní exprese DicerΔHEL1 (DicerΔHEL1/wt ) má minimální dopad na fenotyp....