Výzkum raných fází ontogeneze podčeledi hruštičkových za použití nového protokolu umožňujícícho jejich kultivaci v podmínkách in vitro

Abstract

Lesní polokeře podčeledi hruštičkové (Pyroloideae) jsou důležitým modelem studia mixotrofie - strategie, při které je využíván jak uhlík z fotosyntézy, tak z houbového symbionta. Kvůli jejich iniciální mykoheterotrofii je dlouho nebylo možné vyklíčit mimo přirozené prostředí, a to jak pro studium jejich fyziologie, k medicínským účelům nebo pro účely jejich ochrany. Za pomoci nově popsaného kultivačního postupu, kterým bylo dosaženo velmi vysokých klíčivostí, bylo možné prozkoumat klíčení a rané fáze ontogeneze hruštičkových. Silnou dormanci semen je nutné narušit oxidačním činidlem v kombinací s kyselinou a semena vysévat na komplexní média obohacená o rozpustné sacharidy. Chladová stratifikace není nutná, ale důležitá je kultivace ve tmě. Pozorovali jsme několik konvergencí s orchidejemi, zejména tzv. prachová semena s malým embryem, které při klíčení rostou do nediferencovaných struktur funkčně podobných protokormům orchidejí, ze kterých vyrůstá jen jeden meristém. Na rozdíl od orchidejí je první meristém kořenový a až mnohem později, adventivně, vznikají meristémy prýtů. Jak neschopnost růstu mladých rostlin na kultivačním médiu bez přidaného sacharidu, tak zvýšené množství stabilního izotopu 13 C v pletivech dospělých hruštiček rostoucích in situ v porovnání s okolními autotrofními rostlinami,...

Forest subshrubs Pyroloideae are important models to study mixotrophy - a strategy where both carbon from photosynthesis and fungal one is used. Due to their initial mycoheterotrophy it was impossible to germinate these plants outside natural habitats neither for study of their physiology, medicinal purposes nor for their conservation. Thanks to our novel cultivation method which yields high germination percentages, it was possible to study germination and post-germination ontogenesis of Pyroloideae. It is necessary to break strong dormancy of seeds by bleach and acid and to sow seeds on complex media amended by soluble carbohydrates. Cold stratification turned out to be unnecessary while cultivation in dark was crucial. Many convergencies with orchids were observed, mainly that dust seeds with tiny embryo arrested at globular stage germinate into undifferentiated structures functionally similar to orchid protocorms, from which only one meristem emerges. On the contrary to orchids, the first meristem formed is the root meristem and much later, adventitious shoots appeared. Inability of young plants to grow in the absence of soluble carbohydrates and elevated amount of 13 C stable isotope in tissues of adult plants growing in natural habitats compared to surrounding autotrophic controls suggests,...