Hyaluronan-degrading enzymes and their utilization as tools for the preparation of oligosaccharides and derivatives

Abstract

Hyaluronan (HA) je jednoduchý glykosaminoglykan, který se nachází ve všech tkáních obratlovců jako základní složka extracelulární matrix. Jeho molekulová hmotnost se může lišit od několika megaDaltonů až po méně než jeden kiloDalton. Na základě své velikosti získává četné biologické vlastnosti a lze jej tak využít v kosmetickém a farmaceutickém průmyslu pro různé aplikace. Tato výzkumná oblast se v současné době zabývá dvěma hlavními výzvami, kterými jsou: A) Vývoj nových nástrojů pro analýzu a přípravu nových a nákladově efektivních produktů HA. Enzymatické nástroje hrají klíčovou roli ve vývoji nových materiálů na bázi HA. Kategorií takových slibných enzymů jsou β-D-glukuronidázy (β-GUS). β- GUS katalyzují hydrolýzu zbytku kyseliny β-D-glukuronové z neredukujícího konce různých substrátů. Nicméně nedostatek specifity vůči HA u většiny β-GUS spolu s vysokou cenou a nízkou čistotou těch β-GUS, které jsou aktivní na HA, brání jejich široké aplikaci. Cílem této studie bylo prozkoumat β-GUS z Bacteroides fragilis (rBfGUS). Abychom toho dosáhli, zaměřili jsme se na vývoj procesů produkce (upstream) a purifikace a imobilizace (downstream) rekombinantní formy rBfGUS a prozkoumali jsme parametry její aktivity a kinetiku. Naše zjištění naznačují, že jsme vyvinuli proces s vysokou výtěžností produkce...