Cellular protein interactions studied by advanced fluorescence imaging methods
Studium buněčných proteinových interakcí pomocí pokročilých metod fluorescenční mikroskopie
diplomová práce (OBHÁJENO)
![Náhled dokumentu](/bitstream/handle/20.500.11956/183886/thumbnail.png?sequence=7&isAllowed=y)
Zobrazit/ otevřít
Trvalý odkaz
http://hdl.handle.net/20.500.11956/183886Identifikátory
SIS: 246079
Kolekce
- Kvalifikační práce [10925]
Autor
Vedoucí práce
Konzultant práce
Holoubek, Aleš
Malý, Pavel
Strachotová, Dita
Oponent práce
Krůšek, Jan
Fakulta / součást
Matematicko-fyzikální fakulta
Obor
Biofyzika a chemická fyzika se specializací Experimentální biofyzika a chemická fyzika
Katedra / ústav / klinika
Fyzikální ústav UK
Datum obhajoby
4. 9. 2023
Nakladatel
Univerzita Karlova, Matematicko-fyzikální fakultaJazyk
Angličtina
Známka
Výborně
Klíčová slova (česky)
Konfokální mikroskopie|časově rozlišená fluorescence|fluorescenční anizotropie|FLIM|FRET|homoFRET|fluorescenční proteiny|proteinové interakceKlíčová slova (anglicky)
Confocal microscopy|time-resolved fluorescence|fluorescence anisotropy|FLIM|FRET|homoFRET|fluorescence proteins|protein interactionsTáto diplomová práca sa venuje štúdiu dôležitého nádorového supresoru, p53, a jeho interakčného partnera, nukleofosminu (NPM) v živých bunkách. Proteíny sú skúmané pomocou fluorescenčných konfokálnych techník ako sú: mikroskopia zobrazovania doby života a zobrazovanie fluorescenčnej anizotropie. Práca je primárne zameraná na L344P mutant proteínu p53wt a jeho interakciu s NPM. V práci skúmame oligomerizačný stav proteínu p53-L344P in vivo, ktorý sa javí byť za fyziologických podmienok monomerický potvrdzujúc výsledky in vitro meraní iných štúdií. Ďalej ukazujeme, že proteíny p53wt a p53-L344P spolu tvoria v bunečnom jadre komplexy. Neskôr porovnávame interakciu proteínu NPMmutA s p53wt a p53-L344P. V našich zisteniach ukazujeme, že mutant L344P nie je pomocou NPMmut vyťahovaný z bunečného jadra do cytoplazmy ako je tomu v prípade p53wt. V práci tak�ež skúmame oligomerizačný stav proteínu p53wt, potom, čo bol vy�ahnutý do cytoplazmy. V diskusii navrhujeme ďalšie cesty skúmania interakcie týchto dvoch proteínov.
This thesis studies an important tumor suppressor, p53, and its interac�on partner, nucleophosmin (NPM), in living cells. Proteins are studied using fluorescence confocal microscopy techniques such as fluorescence life�me imaging and fluorescence anisotropy measurements. The primary focus of the research is on a specific variant of the p53 protein called p53-L344P, which is generated by a point muta�on from its original form (p53wt). We inves�gate the oligomeriza�on state of p53-L344P in vivo, which appears to be monomeric, confirming the results of in vitro experiments from other studies. Further, we show that p53wt and p53-L344P can form complexes with each other. We compare the interac�on of the NPMmutA protein with p53wt and p53-L344P proteins. Our findings reveal that the L344P mutant is not transferred from the nucleus to the cytoplasm in the presence of NPMmut, as is p53wt. Furthermore, we inves�gate the oligomeriza�on state of p53wt when it is in the cytoplasm and propose avenues for further research into this interac�on.
Citace dokumentu
Metadata
Zobrazit celý záznamSouvisející záznamy
Zobrazují se záznamy příbuzné na základě názvu, autora a předmětu.
-
Měření vnitrobuněčné koncentrace iontů v mikroorganismech
Výsledek obhajoby: OBHÁJENOVodáková, Adéla (Univerzita Karlova, Matematicko-fyzikální fakulta, 2013)Datum obhajoby: 28. 5. 2013Diplomová práce se zabývá měřením vnitrobuněčné koncentrace iontů v bakteriích Escherichia coli a kvasinkách Saccharomyces cerevisiae pomocí geneticky kódovaných fluorescenčních sond obsahujících zelený fluorescenční protein ... -
Tracking membrane permeabilization on single lipid vesicles - method development.
Výsledek obhajoby: OBHÁJENOGücklhorn, David (Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakulta, 2022)Datum obhajoby: 12. 9. 2022Protein complexes are challenging systems to study, especially when these complexes form on lipid membranes only for a short period of time. This is also the case of fibroblast growth factor 2 (FGF2), a protein that has ... -
Bifunkční BODIPY pro optické značení biomolekul
Výsledek obhajoby: OBHÁJENOBartoň, Jan (Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakulta, 2013)Datum obhajoby: 11. 6. 2013V této práci byl připraven ve vodě rozpustný derivát BODIPY s aktivní skupinou umožňující připojení dalších skupin. Cílová aplikace tohoto bifunkčního bioortogonálního derivátu BO- DIPY je fluorescenční značení biomolekul ...