Stanovení steviových glykosidů metodou HPLC

Abstract

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biofyziky a fyzikálnej chémie Kandidát: Marcela Hollá Vedúci diplomovej práce: Ing. Martin Drastík, Ph.D. Názov diplomovej práce: Stanovení steviových glykosidů metodou HPLC Vyvinuli a validovali sme metódu HPLC na súčasné stanovenie hlavných stéviových glykozidov stéviozidu a rebaudiozidu A v potravinových doplnkoch. Separácia prebieha v móde hydrofilnej interakčenej chromatografie na kolóne s povrchovo poréznymi časticami. Metódu sme aplikovali na analýzu sladidiel s obsahom stéviových glykozidov Valosun, SlaDIA, Solia a na analýzu extraktu zo sušených listov stévie. Separácia prebiehala na kolóne Kinetex 2,6u HILIC 100Å (100×2,1 mm; 2,6 µm) Phenomenex, s izokratickou elúciou mobilnou fázou so zložením acetonitril/0,05 M pufor mravčanu amónneho okysleného kyselinou mravčou na pH=3, v pomere 90:10, rýchlosťou prietoku mobilnej fázy 0,7 ml/min, teplotou kolóny 30 řC, tlakom 19,8 MPa, UV detekciou pri 203 nm a objemom nástreku 1 µl. Výsledky analýz sme porovnali s obsahom stéviových glykozidov deklarovaným výrobcom. Vyninutá metóda umožňuje rýchlu analýzu potravinových doplnkov a rastlinných extraktov s obsahom stéviových glykozidov. Kľúčové slová: stéviové glykozidy, stéviozid, rebaudiozid A, Stevia rebaudiana Bertoni, vysokoúčinná...

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biophysics and Physical Chemistry Candidate: Marcela Hollá Supervisor: Ing. Martin Drastík, Ph.D. Title of Diploma Thesis: Determination of steviol glycosides by HPLC A new HPLC method was developed and validated for simultaneous detemination of major steviol glycosides stevioside and rebaudioside A in food supplements. Separation took place in hydrophilic interaction chromatography mode on column with core-shell particles. The method was aplicated on analysis of steviol glycosides in products Valosun, SlaDIA, Solia and extract from dried stevia leaves. Isocratic separation was performed using Kinetex 2,6u HILIC 100A, (100 x 2,1 mm; 2,6 µm), Phenomenex analytical column with mobile phase consisted of acetonitrile/0,05 M ammonium formate adjusted with formic acid to pH=3 in ratio 90:10, with flow rate 0,7 ml/min, column temperature set at 30 řC, pressure 19,8 MPa, UV detection at 203 nm and injection volume 1 µl. We compared the results of the analyzes with content of stevioside glycosides declared by the manufacturer. The new developed method allows rapid analysis of food supplements and plant extract containig steviol glycosides. Key words: steviol glycosides, stevioside, rebaudioside A, Stevia rebaudiana Bertoni, high...