Development of a reliable test system for purinergic P2X3 receptors

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Studentka: Šárka Tomanová Školitelé: Prof. PharmDr. Martin Doležal, Ph.D., Prof. Dr. Christa Elisabeth Müller Název diplomové práce: Vývoj spolehlivého testovacího systému pro purinergní P2X3 receptor Purinergní P2X3 receptor je spojen s iontovým kanálem. Nalezen byl ve všech savčích tkáních, avšak nejhojnější výskyt byl pozorován v centrální i periferní nervové soustavě a v hladké svalovině, kde může být zodpovědný za patologické poruchy jako je viscerální a neuropatická bolest, zánětlivá onemocnění či psychiatrické stavy. Látky blokující aktivitu P2X3 receptoru by tedy mohly být využity jako potenciální léčiva těchto chorob. P2X3 receptor patří mezi iontové kanály s velmi rychlou desenzitizací, což značně ztěžuje měření jeho aktivity. Bylo zjištěno, že jednobodová S15V mutace, kdy je aminokyselina serin v poloze 15 zaměněna za aminokyselinu valin, prodlouží desenzitizaci a signál se stává měřitelným. Tato mutace by tedy mohla být účinným nástrojem pro farmakologickou charakterizaci dosud nedostatečně prozkoumaného P2X3 receptoru. V naší práci byla DNA P2X3 S15V receptoru několika kroky vpravena do retroviru, kterým byly následně nakaženy astrocytomální buňky lidského mozku označované...

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmaceutical Chemistry and Drug Control Student: Šárka Tomanová Supervisors: Prof. PharmDr. Martin Doležal, Ph.D., Prof. Dr. Christa Elisabeth Müller Title of diploma thesis: Development of a reliable test system for purinergic P2X3 receptors Purinergic P2X3 receptor is a ligand-gated ionotropic channel that occurs in all mammalian tissues. The highest occurrence has been observed in central and peripheral nervous system and smooth muscles, where P2X3 receptors participate in pathological disorders such as visceral and neurophatic pain, inflammatory reactions and psychiatric disorders. Compounds capable of blocking P2X3 receptor activity could be therefore used as potential drugs for treatment of these states. P2X3 receptor belongs to fast- desensitizing ionotropic channels, which makes the measurement of its activity very difficult. It was described that one point S15V mutation, in which the amino acid serine in a position 15 is replaced by amino acid valine, slows down the desensitization rate and the signal becomes easily measurable. This simple mutation may be used as an effective tool for characterization of insufficiently explored P2X3 receptor. The P2X3 S15V receptor DNA was inserted into retrovirus and,...