Gene expression analysis of selected UDP-glucosyltransferases from Haemonchus contortus

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Mgr. Michal Janura Školitel: Ing. Petra Matoušková, PhD. Název rigorózní práce: Stanovení exprese mRNA vybraných UDP-glukosyltransferas u parazita Haemonchus contortus Hemonchóza je jednou z nejzávažnějších parazitárních onemocnění u malých přežvýkavců způsobena parazitem Haemonchus contortus (vlasovka slézová). Rezistence na anthelmintika způsobuje problémy v léčbě této nemoci a zvyšuje náklady na její léčbu. Při účinné terapii proti rezistentním parazitům by se zlepšila ekonomická situace v zemědělství. Mechanizmy způsobující rezistenci u H. contortus jsou pořád nedostatečně známé. Rezistentní H. contortus je schopen produkovat mnohem víc glukózových konjugátů benzimidazolového anthelmintika albendazolu (ABZ) než citliví jedinci. V genomu H. contortus bylo identifikováno více než 40 genů pro UDP-glukosyltransferázy (UGT), které disponují širokou rozmanitostí v této rodině enzymů. Táto práce je část systematického výzkumu zaměřeného na stadium UGT enzymů, kterými je ABZ detoxifikován. Pro zjištění, který z UGT enzymů způsobuje zvýšený metabolismus ABZ se analyzovaly mRNA hladiny 8 vybraných genů z dospělých jedinců rezistentního kmene H. contortus pomocí real-time PCR, které se následně...

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Mgr. Michal Janura Supervisor: Ing. Petra Matoušková, PhD. Title of thesis: Gene expression analysis of selected UDP-glucosyltransferases from Haemonchus contortus Haemonchosis is one of the most important parasitical diseases in small ruminants caused by Haemonchus contortus. Resistance to anthelmintics causes several problems in therapy of the disease and it increases costs of the therapy. With an effective therapy of resistant parasites the economical situation in agriculture would improve. Resistance mechanisms in H. contortus are still insufficiently understood. The resistant H. contortus isolate forms significantly more glucose conjugates of benzimidazole anthelmintic albendazole (ABZ) than the susceptible one. More than 40 UDP-glucosyl transferases (UGT) genes were identified in the genome of H. contortus, which displays a great variety in this family of enzymes. This thesis is a part of a systematic research focused on studying UGT enzymes, by which ABZ is detoxified. To investigate, which one of the UGTs is responsible for the increased metabolism of ABZ, mRNA levels of eight selected genes were analyzed by real-time PCR in adults of resistant isolate and compared with...