Význam trombofilních a imunologických faktorů v lidské reprodukci

Abstract

The aim of presented study was to compare frequencies of eight antiphospholipid antibodies (aPL) in serum and assorted genetic thrombophilic factors and their mutual relation in patients with recurrent pregnancy loss (RPL) and controls. Enzyme-linked immunosorbent assay was used for detection of aPL against phosphatidyl-L-serine, phosphatidylethanolamine, phosphatidylinositol, phosphatidyl- DL-glycerol, phosphatidic acid, annexin V, cardiolipin, and beta2-GPI. Thrombophilic mutations factor V Leiden (F5 G1691A), F II G20210A, and MTHFR C677T and A1298C variants were determined using a melting curve analysis of the PCR amplification product detected by the fluorescence resonance energy transfer (FRET). PAI1 (-675)4G/5G, PROZ intron F G79A, PROZ A(-13)G and PROZ R255H variants were determined using standard PCR-RFLP method. Genotypes distribution and allelic frequencies were calculated. Correlation between aPL and thrombophilic factors was tested by chi-square and Fisher exact test. Our results showed significantly increased prevalence of aPL against phosphatidylinositol (17 - 19.6 % dependent on number of spontaneous miscarriages) and against phosphatidyl-L-serine (18-25 %). aPL in IgG prevailed. In 96 % of studied group we found at least one risk factor (either aPL positivity or thrombophilic factor). Both...

Cílem studie bylo stanovit frekvence osmi antifosfolipidových protilátek (aPL) a vybraných genetických trombofilních faktorů a jejich vzájemný vztah u pacientek s opakovanými těhotenskými ztrátami (recurrent pregnancy loss, RPL) a u kontrolního souboru zdravých žen. K detekci protilátek proti fosfatidyl-L-serinu, fosfatidylethanolaminu, fosfatidylinositolu, fosfatidyl-DL-glycerolu, kyselině fosfatidové, annexinu V, kardiolipinu a beta2-GPI jsme využili metodu ELISA. Trombofilní mutace faktor V Leiden (F5 G1691A), F II G20210A a varianty MTHFR C677T a MTHFR A1298C jsme stanovili metodou analýzy křivky tání PCR produktu na podkladě rezonančního přenosu fluorescenční energie (FRET). K detekci variant PAI1 (-675)4G/5G, PROZ intron F G79A, PROZ A(-13)G a PROZ R255H byla zvolena standardní metoda PCR-RFLP. Ze získaných dat jsme vykalkulovali distribuce genotypů a alelické frekvence jednotlivých variant. Shodu sledovaného souboru a kontrol a vztah mezi přítomností aPL a potenciálních trombofilních faktorů jsme testovali chí-kvadrát testem a Fisherovým exaktním testem. Výsledky studie ukazují signifikantně zvýšenou frekvenci aPL proti fosfatidylinositolu ve sledovaném souboru (17 - 19,6 % v závislosti na počtu RPL) a fosfatidyl-L-serinu (18 - 25 %). Převažovaly protilátky ve třídě IgG. V 96 % byl přítomen alespoň...