Možnosti a význam dlouhodobé kultivace embryonálních buněk různých živočišných druhů

Abstract

Embryonic cells inside the blastocyst, which divide and differentiate into cells of all tissues of organism, are called embryonic stem (ES) cells. Using the ES cells for transplantations is one the potential ways in regenerative medicine. The present study deals with two different lines of mouse pluripotent cells: embryonic carcinoma (EC) cells line P19 and ES cells line D3. The in vitro cultivation was performed in basal cultivation medium with fetal bovine serum (FBS) and in addition of leukemia inhibitory factor (LIF) in case of ES cells. The neurodifferentiation was induced by medium without FBS and without LIF in case of ES cells and supported by retinoic acid in case of P19 cells and embryoid bodies cultivation in case of ES cells. Pluripotency and neurodifferentiation of the cells were confirmed by presence of molecular markers of pluripotency and neurodifferentiation in both lines in nondifferentiated and differentiated states. Mouse EC P19 cells were transfected by gene for green fluorescent protein (GFP) and used for transplantation in cerebellum of wild type (WT) and Lurcher (Lc) mutant mice. Nondifferentiated cells (P19) and neuroprogenitors (NPG) derived from these cells were used. The study followed the survival, morphology and localization of the grafts. The survival of both types of GFP...

Embryonální buňky uvnitř blastocysty, které se dále dělí a diferencují v buňky všech tkání organismu se nazývají embryonální kmenové (ES) buňky. Využití lidských ES buněk formou transplantací je jednou z možných cest regenerativní medicíny. Předložená práce zahrnuje studium 2 různých linií myších pluripotentních buněk - embryonálních karcinomových buněk (EC) P19 a ES buněk linie D3. Buňky jsme kultivovali v základním kultivačním médiu s fetálním bovinním sérem (FBS) a navíc u ES buněk s leukemickým inhibičním faktorem (LIF). Tyto složky zajišťují jejich pluripotenci a sebeobnovu. Následovala jejich neurodiferenciace změnou kultivačního média, bez FBS a u ES buněk i bez LIF. Naopak do média byla přidávána k indukci neurodiferenciace retinová kyselina (RA) a u ES buněk byla navíc zařazena kultivace embryoidních tělísek (EBs). Pluripotence a neurodiferenciace buněk byla ověřena molekulárně-biologickými metodami, kterými byly zjištěny u obou linií nediferencovaných buněk markery pluripotence a po jejich neurodiferenciaci přítomnost neuronálních markerů. Následovaly transplantace, při nichž byly myší EC P19 buňky trvale transfekované genem pro zeleně fluoreskující protein (GFP) aplikovány do zdravého mozečku myší typu wild (WT) a postiženého mozečku myší typu Lurcher (Lc). Byly použity nediferencované buňky...