Využití xCELLigence při studiu účinků irinotecanu na buňky kolorektálního karcinomu in vitro

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Lenka Vatahová Školitel: RNDr. Věra Králová, Ph.D. Název diplomové práce: Využití xCELLigence při studiu účinků irinotecanu na buňky kolorektálního karcinomu in vitro Irinotecan patří mezi cytostatika, podává se buď v monoterapii nebo v kombinaci s 5- fluorouracilem (5-FU). Jeho mechanismus účinku spočívá v blokaci topoizomerázy I, čímž vznikne ireparabilní jednovláknový zlom, jenž je pro buňku letální. V naší práci jsme se zabývali využitím metody xCELLigence, která umožňuje sledování buněk v reálném čase, při studiu účinků irinotecanu na buňky kolorektálního karcinomu. xCELLigence byla porovnávána se 2 metodami na stanovení viability buněk, a to s metodou WST-1 a s metodou Brilliant Blue (BB). Experimenty byly provedeny na 3 buněčných liniích odvozených z kolorektálního karcinomu- SW 620, SW 480 a HT 29. Buňky byly ovlivněny irinotecanem v koncentračních rozmezích od 5 do 100 µg/ml po dobu 24, 48 a 72 hodin. Metody jsme mezi sebou porovnali, přičemž hodnoty se lišily dle typu buněk. U všech buněk jsme vypočítali hodnotu IC 50 v čase 72 hodin po ovlivnění. A zároveň jsme ukázali, že metoda xCELLigence se pro získání hodnoty IC 50 jevila v tomto časovém intervalu jako nejcitlivější, v...

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Bc. Lenka Vatahová Supervisor: RNDr. Věra Králová, Ph.D. Title of diploma thesis: The use of xCELLigence in the study of effects of irinotecan in colorectal cancer cells Irinotecan is one of the cytostatic drugs, administered either alone or in combination with 5- fluorouracil (5-FU). Its mechanism of action lies in blocking topoisomerase I resulting in a single-threaded irreparable disruption, which is lethal for the cell. In our study, we examined the use of xCELLigence in the study of effects of irinotecan in colorectal cancer cells. xCELigence, which allows tracking of cells in real time was compared with 2 other methods for determination cell viability, specifically with the WST-1 assay and the Brilliant Blue (BB) assay. Experiments were performed on three cell lines derived from colorectal carcinoma- SW 620, SW 480, and HT 29. The cells were treated with irinotecan in concentration ranges from 5 to 100 µg/ml for 24, 48 and 72 hours. We compared the sensitivity of individual methods and found, that the values differed according to the cell lines. In all cells we calculated the IC 50 value at the time of 72 hours of treatment with irinotecan. And while we have shown that the...