Analýza extraktu z rostlinné drogy Orthosiphon stamineus pomocí kapilární zónové elektroforézy

Abstract

Metoda kapilární zónové elektroforézy byla užita pro separaci látek rostlinného původu ze skupiny fenolických kyselin (skořicová, karnosolová, rozmarýnovám kávová) a flavonoidů (rutin, apigenin, kveretin luteolin). Postupnou optimalizací složení testovaných pufrů se jako nejvhodnější ukázalo použití 50 mM borátového základního elektrolytu s pH 9. Separace probíhala v kapiláře s vnitřním průměrem 50 μm o efektivní délce 50 cm. UV - detekce probíhala při vlnové délce 200 nm a doba analýzy trvala přibližne 23 min. Pro zvýšení citlivosti UV - detekce byly vyvíjeny metody využívající zakoncentrování z velkého objemu vzorku. Dobré výsledy poskytovalo využití zakoncentrování se změnou polarity umožňující dávkování vzorku představující asi 50% celkového objemu kapiláry. Dosažené detekční limity při 60 násobném zkoncentrování se pohybují v rozmezí 0,006-0,014 μg/ml. Systém byl použit na analýzu rostlinného materiálu, v methanolickém extraktu byl stanoven obsah kyseliny rozmarýnové 710,9 μg (RDS = 2,36%) a kyseliny kávové 38,2 μg (RDS = 3,73%) na g práškované nati Orthosiphon stamineus.

Capillary zone electrophoresis with UV detection at 200 nm was developed for the determination of four phenolic acids and four flavonoids in plant material. The electrophoretic behavior of phenolic compounds was investigated to optimize their separation as a function of buffer pH, buffer concentration. A 50m mM borate buffer, pH 9 was found most favorable. The separation was obtained with fused-silica capillary column (50 cm x 50 μm I.D.) an applied voltage of 25 kV and a temperature of 25řC. For increase injection volume and decrease the detection limits was performed by applying Large-volume sample stacking with polarity switching. The limits of detection were between 0,006 and 0,014 μg/ml. The method was used to determine these compounds in methanolic extract of Orthosiphon stamineus leaves that contained 710,9 μg g-1 pulverized drug of rosmarinic acid and 38,2 μg g-1 of caffeic acid. About a 60- fold enhancement in senzitivity, relative to a conventional injection, was demonstrated in a real sample.