Stanovení vitamínů A, D a E metodou sekvenční injekční chromatografie

Abstract

Byl vypracován postup separace vitamínů A, D a E pomocí monolitických kolon zapojených v systému sekvenční injekční analýzy. Po provedené optimalizaci byly vybrány následující podmínky separace: analýza na: monolitické koloně 25 mm dlouhé Chromolith Flash RP-18e kolony, 4,6 mm I.D. (Merck, Germany), při rychlosti (10 µl/s) za použití mobilní fáze acetonitril metanol (1:1, v/v). Monolitická kolona byla v SIA systému zapojena mezi vícecestný ventil a průtokovou Z celu. Spektrofotometrická detekce byla provedena při vlnových délkách absorpčních maxim pro vitamín A - 324 nm, D - 265 nm, E - 285. Celková délka SIA analýzy byla 400 s (z toho 230 s trvala vlastní separace). Ze základních chromatografických validačních parametrů byly vyhodnoceny faktor symetrie AS, rozlišení RS, počet teoretických pater a opakovatelnost. Faktor symetrie pro vitamín A - 1,309, pro vitamín D2 - 1,302, pro D3 - 1,286 , pro vitamín E - 1,158. Rozlišení píků pro vitamíny A-D2 je 3,607, D2-D3 4,232, D-E 1,532. Počet teoretických pater pro vitamín A 998, pro vitamín D2 1621, pro vitamín D3 2091 a vitamín E 2376. Opakovatelnost byla vypočítána z 6 nástřiků, kdy z výšky píků jednotlivých látek byla vypočítaná relativní směrodatná odchylka. Opakovatelnost je pro vitamín A - 0,53 %, pro vitamín D2 - 0,35 %, pro vitamín D3 - 0,81 % a...

The working isntruction was created for separation vitamins A, D and E by means of monolithic column engaged in system sequentional injectional analysis. Following conditions of separation were chosen after performance of optimalization: Analysis at monolithic column 25 mm long Chromolith Flash RP-18e column, 4,6 mm I.D. (Merck, Germany), with speed (10 µl/s) with applied mobile phase acetonitril metanol (1:1, v/v). Monolithic column was in SIA system and was engaged between moreway valve and flow Z cell. Spectrophotometric detection was performed at wave length for absorbing maximum for vitamins A - 324 nm, D - 265 nm, E - 285. Total SIA analysis time was 400 s (from that 230 s lasted separation process). From basic chromatographic validation parameters were evaluated the following symetric factor As, resolution Rs, amount theoretical trays and repeatability. Symetric factor for vitamin A - 1.309; vitamin D2 - 1.302; vitamin D3 - 1.286; vitamin E - 1.158. Peak resolution for vitamins A-D2 je 3.607; D2-D3 4.232; D-E 1.532. Amount theoretical stages for vitamin A 998, vitamin D2 1621, vitamin D3 2091 and vitamin E 2376. Repeatability was worked out from 6 sprays, and relative standard deviation of particular substances was calculated from the highest point of the graph peak. Repeatability was for...