HPLC analýza léčiv a potenciálních léčiv v biologickém materiálu

Abstract

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) je v současnosti jednou z nejprogresivnějších separačních metod umožňující současně kvantitativní i kvalitativní analýzu. Významnou oblastí užití HPLC je stanovení léčiv a jejich metabolitů v biologickém materiálu. Tato práce byla zaměřena na vývoj chromatografických podmínek vhodných pro HPLC analýzu dvou nových potenciálních léčiv odvozených od aroylhydrazonu, HNAF-INH a 4,6DAR-INH, v biologickém materiálu a jejich následnou aplikaci při hodnocení stability těchto látek v plasmě. Analyzované chelátory byly připraveny obměnou struktury salicylaldehyd isonikotinoyl hydrazonu (SIH) s cílem zlepšit stabilitu látky v plasmě. Jako vhodná stacionární fáze byla vybrána HPLC kolona LiChroCART® HPLC - cartridge LiChrospher® 100 RP - 18e (15μm) s předkolonou LiChroCART® 4-4 Purospher® RP - 18 (5μm). Mobilní fází byla v případě HNAF-INH směs: fosfátový pufr (0,01 mol/l vodný roztok NaH2PO4 · 2 H2O s 2 mmol/l EDTA, pH 3): methanol, 42:58 (v/v). Teplota na koloně byla 25 ◦C, průtok 1,0 ml/min a UV detekce 288 nm, jako vnitřní standard byl použit SIH. Mobilní fáze pro hodnocení 4,6DAR-INH: fosfátový pufr (0,01 mol/l vodný roztok NaH2PO4 · 2 H2O) s 2 mmol/l EDTA, pH 6), směs (methanol - acetonitril, 1:1), 50:50 (v/v). Teplota na koloně 25 ◦C, průtok 1,0 ml/min, UV...

High-performance liquid chromatography (HPLC) is currently one of the most progressive separation methods, permitting, simultaneously, both quantitative and qualitative analysis. An important area for the utilisation of HPLC is the identification of drugs and their metabolites in biological materials. This study was focused on the development of chromatographic conditions appropriate for HPLC analysis of two new potential drugs derived from aroyl-hydrazone, HNAF-INH and 4,6DAR-INH, in biological material and its subsequent application in the assessment of the stability of these substances in plasma. Analysed chelators were prepared by the modification of the structure of salicylaldehyde isonicotinoyl hydrazone (SIH) with the purpose of improving the stability of the substance in plasma. As a suitable stationary phase the HPLC column LiChroCART® HPLC - cartridge LiChrospher®100 RP - 18e (15μm) with the pre-column LiChroCART® 4-4 Purospher® RP - 18 (5μm) was chosen. The mobile phase in this case represented by a HNAF-INH compound: phosphate buffer (0,01 mol/l aqueous solution of NaH2PO4 · 2 H2O with 2 mmol/l EDTA, pH 3) : methanol, 42:58 (v/v). The temperature in the column was 25řC, the flow rate 1,0 ml/min and UV detection was performed at 288 nm; SIH was used as an internal standard. The mobile...