Repopulation of Decellularized Scaffold with Cells: Development and Optimization of Repopulation Techniques for Engineering Functional Vessel and Liver Tissue

Abstract

Úvod: Cílem disertační práce je vývoj bioreaktorů pro repopulaci decelularizovaných jaterních scaffoldů buňkami. V posledním půlstoletí se poptávka po transplantacích neustále zvyšuje, ale počet dostupných dárců tento trend nesleduje. Jednou z potenciálních cest, jak řešit komplikace způsobené nedostatkem dárců, je použití prasečích decelularizovaných jater jako scaffoldů pro kultivaci buněk pacienta in vitro s cílem přípravy funkčního jaterního štěpu. Abychom tohoto cíle dosáhli, nejprve jsme celá prasečí játra decelularizovali a poté jsme studovali strategie pro výsev buněk in vitro. Vzhledem k požadovanému počtu buněk a náročnosti výsevu orgánu o hmotnosti přibližně 1 kg zkoumáme tento složitý orgán v jeho dílčích částech se záměrem použít vyvinuté strategie společně. Metody: Provedli jsme nezávislá vyšetření prasečích jater a duté žíly. Nejprve byly játra i dutá žíla decelularizovány perfuzí detergentů, aby se odstranily prasečí buněčné složky. Poté bylo použito histologické barvení, DAPI a stanovení zbytků DNA k potvrzení účinnosti decelularizace. Další charakterizace zahrnovala kvantifikaci strukturních proteinů a imunofluorescenční barvení k ověření účinků decelularizace na extracelulární matrix. Kromě toho byly nativní a decelularizované prasečí duté žíly zkoumány pomocí mechanického...