C18 stacionární fáze s pozitivním povrchovým nábojem pro separaci peptidů mobilní fází s nízkou iontovou sílou

Abstract

Charles University, Faculty of Pharmacy Department of Analytical Chemistry Candidate: Karsakov Aleksandr Supervisor: doc. PharmDr. Juraj Lenčo, Ph.D. Title of diploma thesis: C18 stationary phase with positive surface charge for separation of peptides by mobile phase with low ionic strength In proteomic LC-MS analyses, a mobile phase acidified with formic acid at a concentration of 0.1% is commonly used, ensuring acceptable chromatographic separation and effective electrospray ionization. To increase the MS detector response through more efficient ionization, lower concentrations than 0.1% can also be used. However, conventional C18 stationary phases lose effectiveness at low ion strength of the mobile phase, especially in the separation of basic analytes. This motivated column manufacturers to modify standard sorbents to enhance their compatibility with mobile phases of reduced ion strength. This led to the development of stationary phases with a positively charged surface. This study explored the possibilities of using mobile phases with low ion strength in combination with C18 stationary phases with a positively charged surface. Three commercially available columns from Agilent, Phenomenex, and Waters were tested for interaction with the positively charged surface, separation efficiency, and...

Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Karsakov Aleksandr Školitel: doc. PharmDr. Juraj Lenčo, Ph.D. Název diplomové práce: C18 stacionární fáze s pozitivním povrchovým nábojem pro separaci peptidů mobilní fází s nízkou iontovou sílou Obvykle se v proteomických LC-MS analýzách používá mobilní fáze okyselená kys. mravenčí v koncentraci 0,1 %, která zajišťuje přijatelnou chromatografickou separaci a účinnou ionizaci elektrosprejem. Pro zvýšení odezvy MS detektoru prostřednictvím účinnější ionizace lze použít i nižší koncentraci než 0,1 %. Klasické C18 stacionární fáze však při nízké iontové síle mobilní fáze ztrácejí účinnost, zejména při separaci bazických analytů. To motivovalo výrobce kolon k modifikaci standardních sorbentů s cílem zvýšit jejich kompatibilitu s mobilními fázemi se sníženou iontovou sílou. Tak vznikly stacionární fáze s kladně nabitým povrchem. Tato práce se zabývala možnostmi využití mobilních fází s nízkou iontovou silou v kombinaci s C18 stacionárními fázemi s pozitivním povrchovým nábojem. Byly hodnoceny tři komerčně dostupné kolony od společností Agilent, Phenomenex a Waters z hlediska interakce s kladně nabitým povrchem, separační účinnosti a kapacity zatížení za podmínek snížené koncentrace kys. mravenčí. Nejvyšší...