Stanovení kynureninu a tryptofanu v suché kapce moči pro využití v klinickém výzkumu a praxi

Abstract

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Analytical Chemistry Candidate: Bc. Denisa Brodská Supervisor: assoc. prof. RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Consultant: RNDr. Dorota Turoňová, Ph.D., Mgr. Nikola Přívratská Title of diploma thesis: Determination of kynurenine and tryptophan in dried urine spot for clinical research and practice The dried urine spot (DUS) is a modern sample preparation technique that requires only minimal amounts while simplifying handling and storage compared to conventional techniques. DUS also has a high potential for use because it provides improved stability of analytes in biological matrices. The subject of the research itself was the substances kynurenine and tryptophan. In clinical practice, these two substances are determined in biological matrices due to their connection with many biochemical processes and pathological conditions. The aim of this diploma thesis was to develop and optimize the extraction method and also to perform an appropriate validation of the analytical method, which will subsequently apply to real samples. Samples prepared by the DUS method were extracted using 150 µL of a solvent containing 65% methanol with 0,2% formic acid and 35% 5 mM ammonium formate in water. These two solutions are also components of the...

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Denisa Brodská Školitel: doc. RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Konzultanti: RNDr. Dorota Turoňová, Ph.D., Mgr. Nikola Přívratská Název diplomové práce: Stanovení kynureninu a tryptofanu v suché kapce moči pro využití v klinickém výzkumu a praxi Metoda suché kapky moči (DUS) představuje moderní techniku úpravy vzorku, která vyžaduje pouze minimální množství za současného zjednodušení manipulace i skladování v porovnání s klasickými technikami. DUS má vysoký potenciál využití i z důvodu, že poskytuje zlepšení stability analytů v biologických matricích. Předmětem samotného výzkumu byly látky kynurenin a tryptofan. V klinické praxi se tyto dvě látky stanovují v biologických matricích pro jejich spojitost s řadou biochemických procesů a patologických stavů. Cílem této diplomové práce bylo vyvinout a optimalizovat extrakční metodu a taktéž provést odpovídající validaci analytické metody, jež budou následně použitelné pro reálné vzorky. Vzorky připravené metodou DUS byly extrahovány za použití 150 µl rozpouštědla obsahujícího 65 % roztoku methanolu s 0,2% kyselinou mravenčí a 35 % 5 mM mravenčanu amonného ve vodě. Tyto dva roztoky jsou zároveň složkami mobilní fáze. Pro kvantifikaci byl využit interní...