Vývoj UHPLC-MS/MS metody pro analýzu vybrané skupiny neurotransmiterů

Abstract

Charles University, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Analytical Chemistry Candidate: Bc. Moldrzyková Karolína Supervisor: prof. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Title of the diploma thesis: The Development of a UHPLC-MS/MS method for the analysis of a selected group of neurotransmitters The aim of this thesis was to develop and optimize a method for the separation and identification of a group of 10 selected neurotransmitters using ultra-high-performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry detection (UHPLC-MS/MS). In the first step, a MS scan was performed to gain m/z of precursor ions, the retention time of standards was monitored. The formation of [M+H]+ and [M-H]- ions was also verified. The most intense fragments of the individual analytes, identified from product ion scans, were selected for SRM. Optimization of the collision energy and the ion source setting was conducted. This initial measurement was carried out on an ACQUITY UPLC BEH C18 column. In stationary phase screening were tested, three reversed-phase columns (ACQUITY UPLC BEH C18, Kinetex F5, ACQUITY UPLC BEH Shield RP C18) and six HILIC columns (Atlantis Premier BEH Z-HILIC, Luna NH2, ACQUITY UPLC BEH Amide, Syncronis HILIC, ACQUITY UPLC BEH HILIC, CORTECS UPLC HILIC). Formic acid in water, ammonium...

Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci KrálovéKatedra analytické chemie Kandidát: Bc. Moldrzyková Karolína Školitel: prof. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj UHPLC-MS/MS metody pro analýzu vybrané skupiny neurotransmiterů Cílem této práce bylo vyvinout a optimalizovat metodu pro separaci a identifikaci skupiny 10 vybraných neurotransmiterů za pomoci ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie s tandemovou hmotnostní detekcí (UHPLC-MS/MS). V prvním kroku byla provedena základní MS analýza za účelem získání experimentálních m/z hmotnostním spektrometrem, mimo jiné byl sledován retenční čas standardů. Ověřen byl mimo jiné vznik [M+H]+ , resp. [M-H]- . Ze skenů produktových iontů byly vybrány nejintenzivnější fragmenty jednotlivých analytů, které byly následně použity při SRM. Byla provedena optimalizace kolizní energie a optimalizace nastavení iontového zdroje. Toto základní měření probíhalo na koloně ACQUITY UPLC BEH C18. V rámci hledání vhodné stacionární fáze byly testovány tři kolony v systémech s RP (ACQUITY UPLC BEH C18, Kinetex F5, ACQUITY UPLC BEH Shield RP C18) a šest HILIC kolon (Atlantis Premier BEH Z-HILIC, Luna NH2, ACQUITY UPLC BEH Amide, Syncronis HILIC, ACQUITY UPLC BEH HILIC, CORTECS UPLC HILIC). Jako vodná složka mobilní fáze byly testovány...