Vývoj HPLC metody stanovení vitamínu D v biologickém materiálu

Abstract

In this diploma work the new HLPC method for simultaneous determination of vitamins D2, D3 and their metabolites (1,25(OH)2D3, 25(OH)D3) using the internal standard was developed. During the suggested assessment the monolith column Chromolith Performance RP-18e, 100 x 4,6 mm was used. The detection was carried out with the help of a diode array detector at wavelenght 265 nm for vitamins D and its metabolites, 295 nm for the internal standard tocol. The mixture of methanol : acetonitrile : water in percentual representation 12,5 : 85 : 2,5 was used as the mobile phase. The flow rate of the mobile phase was 1,5 ml.min-1 and the injection volume of the sample was 20 μl. The total time of the analysis was 3,5 minutes including the equilibration of the column. This method was developed and partially optimised with the standards of vitamins D and will be validated for biological material.

V diplomové práci byla vyvinuta nová HPLC metoda pro stanovení vitamínů D (vitamín D2, D3) a jeho metabolitů (1,25(OH)2D3, 25(OH)D3) v jednom vzorku s využitím vnitřního standardu. Při navrhovaném stanovení byla použita monolitní kolona Chromolith Performance RP- 18e, 100 x 4,6 mm. Detekce byla prováděna pomocí diode array detektoru při vlnové délce 265 nm pro vitamíny D a jeho metabolity, 295 nm pro vnitřní standard tokol. Jako mobilní fáze byla použita směs methanol : acetonitril : voda v procentuelním zastoupení 12,5 : 85 : 2,5. Průtok mobilní fáze byl 1,5 ml/min a nástřik vzorku na kolonu 20 μl. Celková doba analýzy byla 3,5 minuty včetně ekvilibrace kolony. Metoda byla vypracována a částečně optimalizována se standardy vitamínu D a bude dále validována pro biologický materiál.