Analýza atorvastatinu metodou kapalinové chromatografie s využitím fluorescenční derivatizace

Abstract

10.2 Determination of atorvastatin by high performance liquid chromatography with fluorescence detection The main aim of this work was to develop a method for determination of atorvastatin by HPLC, which would be sensitive enough to determine plasmatic concentration of atorvastatin (ng/ml). UV-VIS detection is not sensitive enough for this purpose, therefore fluorescence detection was used. Atorvastatin was derived by 4-brommethyl-6,7-dimethoxycoumarin in N,N- dimethylformamide. Potassium carbonate and 18-crown-6-ether were used as catalysts. Optimal conditions for the reaction were determined as follows: 45 minutes, 20řC in dark. The method of purification of sample from undesired substances was not successful. However HPLC conditions were fully optimized, the column-switching technique was not effective enough. Chromatograms were not so selective, and desired level of sensitivity was not reached.

10 Abstrakty 10.1 Analýza atorvastatinu metódou kvapalinovej chromatografie s využitím fluorescenčnej derivatizacie Hlavným cieľom tejto práce bolo vyvinúť metódu stanovenia atorvastatinu pomocou HPLC, ktorá by bola dostatočne citlivá na stanovenie plazmatických hladín, teda koncentrácii v jednotkách ng/ml. UV-VIS detekcia nie je dostatočne citlivá na tento účel, preto bola použitá fluorescenčná detekcia. Atorvastatin bol derivatizovaný pomocou 4-bromometyl-6,7-dimetoxykumarínu v prostredí N,N-dimethylformamidu, ako katalyzátory boli použité uhličitan draselný a 18-crown-6- ether. Bola prevedená optimalizácia reakčných podmienok, pričom sa zistilo, že optimálne podmienky sú inkubácia v tme po dobu 45 minút pri teplote 20řC. Metódu vyčistenia vzorky od nežiaducich látok sa však optimalizovať nepodarilo. Technika prepínania kolón nebola s použitými kolónami dostatočne účinná, takže výsledné chromatogramy boli aj napriek maximálnej optimalizácii chromatografických podmienok stále značne znečistené interferujúcimi látkami, a teda požadovaná úroveň citlivosti nebola dosiahnutá.